### 冻存前准备

仅对处于对数生长期的细胞进行冻存，细胞汇合度应在80%-90%之间，活率要求达到90%。避免使用老化或过度生长的细胞，以免显著降低复苏后的存活率。

### 试剂与耗材

冻存液应提前在室温或4℃下平衡，以确保效果，禁止反复冻融。冻存管的密封性需严格检查，确保管盖内的橡胶圈完好无损，以防液氮渗入。同时，操作过程中必须佩戴手套，因为DMSO具有致癌性且能够通过皮肤吸收。

### 细胞悬液制备

1. **收集细胞**:     对贴壁细胞进行处理时，先弃去培养基，利用PBS进行润洗，然后用胰酶消化（消化时间应依据细胞类型而定，观察至细胞变圆并脱落时即可），最后加培养基终止消化并转移至离心管。悬浮细胞则直接转移至离心管中。

2. **离心洗涤**:     以1100rpm离心4-5分钟，弃去上清液。

3. **重悬细胞**:     加入适量冻存液（推荐1-2mL），轻柔混匀细胞，设置冻存密度为100万-500万/mL（对于难养细胞，建议≥300万/mL）。可选择性进行计数验证，用20μL细胞悬液与台盼蓝以1:1混合，检测活率。

### 冻存过程禁忌

1. **降温与保存**:     无需程序降温，将冻存管直接放入-80°C冰箱中冷冻过夜。避免温度波动，保持-80℃的存储时间不超过3个月，长期存储需转移至液氮罐。冻存管应避免贴壁存放，以确保冷空气的均匀流通。

2. **特殊细胞处理**:     对于干细胞或原代细胞，在冻存前需用相同品牌的冻存液进行预实验一周，以验证其兼容性。对于DMSO敏感的细胞，建议备份含血清的冻存液以防意外死亡。

### 冻存风险规避指南

1. **DMSO毒性**:     操作全程应佩戴防穿透手套，并在操作台上铺设吸水垫。

2. **细胞复苏成团**:     重悬时应避免气泡，分装前需镜检确认单细胞状态。

3. **管体密封失效**:     冻存前进行浸水测试（37℃水浴10分钟无渗漏）。

4. **特殊细胞死亡**:     干细胞或原代细胞应在冻存前进行预实验以验证兼容性。

### 质控与风险规避

1. **复苏验证**:     在首次冻存后24小时内复苏一管，检测活率并保留幸运存活的细胞备用。复苏时需快速在37℃水浴中解冻（≤2分钟），并立即用培养基稀释洗涤。

2. **污染防控**:     所有分装操作需在超净台内完成，冻存液开瓶后需严格保持无菌。冻存液的pH值需维持在7.2-7.4之间，异常的pH值会影响细胞的生存。

### 冻存细胞复苏步骤

1. 从冰箱中取出冻存的细胞，立即放入37℃水浴槽中快速解冻。

2. 当冻存管中的细胞混合液完全融化后，立即加入1mL培养基与细胞混合，随后将混合液转移至含有约5mL培养基的离心管中，以1000rpm离心5分钟，收集细胞沉淀，谨慎移去上清液。

3. 加入适量的新鲜培养基，使用移液管缓缓加入于细胞沉淀中，轻柔混匀后，将细胞移至事先准备好的培养容器中。

4. 观察细胞状态，待恢复后可进行相关实验处理。

### 注意事项

本产品可用于常规细胞的冻存，在-80℃下可长期保存，存活率可达90-98%。使用本产品时，尽量缩短室温存放的时间，尽快转移至-80℃保存。针对干细胞（如ES细胞）、原代细胞，建议在冻存前进行至少一周的试验性冻存，以确保效果后再进行大规模冻存。

本产品含有10% DMSO，部分DMSO敏感细胞需进行预实验确认效果后再正式使用。对新的未保种细胞类型，建议在使用时将一部分细胞与含血清的冻存液共同冻存，以避免可能的意外情况。取用冻存液均应在超净工作台内无菌操作。

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套进行操作。

### 保存条件

常温运输，短期可在4℃保存，有效期为一年；长期可在-20℃保存，有效期为两年。

### 产品简介

本品含有DMSO、葡萄糖等多种细胞营养成分，适用于各类常见及肿瘤动物细胞株，并可在-80℃下长期保存，无需经过程序性降温过程。其配方成分明确，不含动物来源的蛋白和血清，能够减少各类细菌、病毒以及支原体等污染，保证冻存细胞的安全，且适合无血清培养的细胞和蛋白表达细胞。如有需要，请联系我们，**人生就是博-尊龙凯时**将为您提供优质服务！