本试剂盒仅限于科学研究用途,严禁用于医学诊断检测。该试剂盒采用双抗体一步夹心法的酶联免疫吸附试验(ELISA)技术。步骤如下:
试剂盒使用方法
首先,将样品、标准品和HRP标记的检测抗体依次加入已包被adropin(AD)抗体的微孔中,进行温育并彻底清洗。之后,添加TMB底物,TMB在过氧化物酶的催化下会转变为蓝色,随后在酸的作用下变成黄色。颜色深浅与样品中adropin(AD)浓度呈正相关。最后,利用酶标仪在450nm波长下测定光密度(OD值),并计算样品浓度。
试剂盒组成
本试剂盒的成分如下:
- 微孔酶标板:96孔配置(12孔×8条)、48孔配置(12孔×4条)
- 标准品:03mL*6管
- 样本稀释液:6mL(96孔配置)/3mL(48孔配置)
- 检测抗体-HRP:10mL(96孔配置)/5mL(48孔配置)
- 20×洗涤缓冲液:25mL(96孔配置)/15mL(48孔配置)
- 底物A:6mL(96孔配置)/3mL(48孔配置)
- 底物B:6mL(96孔配置)/3mL(48孔配置)
- 终止液:6mL(96孔配置)/3mL(48孔配置)
- 封板膜:2张
- 说明书:1份
- 自封袋:1个
注:标准品(S0-S5)的浓度依次为0、25、50、100、200、400pg/mL。试剂盒应保存在2-8℃,有效期为6个月。
样品的收集、处理与保存
血清样本应在不含热原和内毒素的试管中收集,避免细胞刺激。血液收集后,需在3000转下离心10分钟以分离血清和红细胞。
血浆应使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,离心30分钟后取上清。细胞上清液同样需要离心去除颗粒和聚合物。
组织样本则需加入生理盐水并捣碎,之后离心10分钟取上清。如果未能及时检测,样本应分装后存放在-20℃,避免重复冻融。
自备设备
- 酶标仪(450nm)
- 高精度加样器及枪头(05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL)
- 恒温箱(37℃)
操作步骤与注意事项
从冷藏环境取出试剂盒后,应在室温下平衡15-30分钟后方可使用;若未用完的试剂板应存放于密封袋中。洗涤液如有结晶,稀释时可用温水帮助溶解。所有加样操作应使用加样器,确保准确性,避免实验误差;加样时间控制在5分钟内。
需同时做标准曲线,并尽量多做复孔。如样本内容过高,需做稀释;同时,封板膜为一次性使用,严格按照说明书操作确保结果可靠。
注意保存底物时应避免光照,并按照传染病处理所有样品和废弃物。本试剂不同批号的成分不得混用。
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