T细胞是适应性免疫系统中的关键淋巴细胞类型，对机体抵御病原体侵袭和维护免疫平衡起着至关重要的作用。在科学研究中，T细胞的分类及分选是重要环节，而在磁珠分选实验中，有许多细节不可忽视，这些细节直接影响分选实验的得率和纯度。本文将详细解析在使用美天旎磁珠进行分选实验时需要关注的关键事项，并深入解读四个热门的T细胞磁珠分选流程（CD3、CD4、CD8、Treg细胞），适用于人源和鼠源样本，涵盖阳性分选、阴性分选及顺序分选策略，助您全面掌握T细胞磁珠分选的核心技术！

关键准备步骤

在开始磁珠分选之前，需要确认多个关键点：

• 确认磁珠：选择适合实验物种、样本来源及目标细胞特征的磁珠。
• 确认分选策略：根据实验指标及后续需求，选择最优的分选策略。阳性分选可直接获得目标细胞，适用于标志物表达特异性强或稀有细胞的分选。
• 确认分选柱：选择合适的分选柱，并确保不超过推荐的细胞量，以免柱子过载影响效果。
• 确认分选平台：根据选择的分选柱匹配相应的分选平台。
• 准备分选缓冲液：根据实验需求选择合适的缓冲液配方，并确保其在4°C条件下预冷。
• 细胞计数和活性检测：分选前对细胞样本进行计数及活性检测，确保细胞活率在85%以上，以获得理想的分选结果。

磁珠分选过程中的注意事项

在磁珠分选过程中，有几个重要的操作细节需要严格遵守：

• 磁珠使用：美天旎磁珠作为胶体溶液，实验前无需摇晃，直接使用即可。
• 分选流程快速进行：确保整个操作过程快速且保持细胞在低温状态，以避免非特异性的标记和细胞损伤。
• 样品加液技巧：每次向分选柱加样前确保上一步骤的液体已完全流空，以避免样品混合。
• 收集操作：在收集磁珠标记的细胞液时，须从磁场中取下分选柱，立即进行冲洗以提高回收率。
• 分选柱为一次性耗材：必须避免重复使用，以确保实验的可靠性和准确性。

分选后的评估

分选结束后，使用流式细胞术检测分选后细胞的活性及比例，以计算分选纯度和得率，具体公式如下：

• 分选纯度： = 分选后目的细胞总数量 / 分选后所有细胞总数量
• 分选得率： = 分选后目的细胞总数量 / 分选前目的细胞总数量

要明确分选前的目的细胞数量是根据标记后的细胞悬液及目的细胞比例得出的。

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