**培养条件**：在收到细胞后，应将其处理并培养至良好状态，然后使用完全培养液灌满并封好瓶口，以确保运输细胞的最佳效果。在接收细胞时，请勿立即打开瓶盖，要及时核对培养瓶上的细胞名称与订购的一致性，同时检查瓶身是否存在破损或漏液等异常情况。如果未发现漏液或污染等问题，使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片以作记录（建议拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，则默认细胞状态良好。

**贴壁细胞传代步骤**：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化状态。若细胞大部分开始变圆并脱落，迅速返回操作台，轻轻敲击培养瓶后添加超过5ml的完全培养基以终止消化。

3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，重新加入1-2ml完全培养基进行重悬。

4. 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（分至两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

**悬浮细胞传代步骤**：

1. 采用半换液法，竖起培养瓶在培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉3ml培养基后补充3ml完全培养基。如培养基变色慢，可直接补充约500µl的FBS。传代时可直接补给5ml培养基后分至两个培养瓶，每隔3次传代后进行一次离心，以去除死细胞。

2. 在离心换液法中，将细胞悬液收集于离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清后补充1-2ml培养基重悬。随后将细胞悬液按1:2的比例分至新T25瓶中，并加入6-8ml按照说明书配置的新完全培养基，以保持细胞的生长活力。

**细胞冻存**：

1. 当细胞生长至培养瓶80%覆盖时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。

2. 向培养瓶中添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，倒置观察。待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，并轻轻吹打使细胞脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

3. 弃上清，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。

4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后期需转入液氮罐，则应在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

**注意事项**：有些细胞粘附性不强，运输过程中可能会出现细胞脱落的现象，这是正常的。如脱离的细胞较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清以作过渡培养，随后再进行操作。对于细胞状态出现问题的情况，请及时与我们沟通，以便于解决问题。**人生就是博-尊龙凯时**期待与您共同维护细胞的健康生长，确保您在细胞实验中获得最佳效果。

**细胞问题处理**：细胞如出现问题，需重发的情况包括：运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；如您的细胞收到后48小时内发现污染，请及时反馈真实实验结果。若细胞在重新复苏后的状态不佳，需提供相关照片，我们将予以重发。

**不予重发的情况**包括：客户造成的污染、误操作导致细胞状态不佳、非推荐培养体系使用后细胞状态不良等。请务必在收到细胞2天内进行反馈沟通，以免影响下一步操作。

如有疑问，请随时与我们联系。**人生就是博-尊龙凯时**始终在您身边，助力您的研究与实验。